乙型肝炎HBV的发生与治疗现状含模型构

肝炎病毒种类主要包括五种，分别为甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)和戊型肝炎病毒(HEV)。其中，乙肝病毒HBV影响范围最广，全球54%的肝癌是由HBV感染所导致，全世界约有2.5亿人感染HBV，我国约有万人被诊断为慢性HBV感染者。

乙型肝炎病毒属于嗜肝病毒的家族，据报道该病毒能够直接地感染肝脏细胞。一个完整的HBV病毒通常也被称为Dane(丹氏)颗粒，主要由两部分组成，包括病毒的衣壳以及内部的核心。当机体收到乙肝病毒攻击，且病毒入侵至机体的肝细胞之后，会继而脱去衣壳，随后病毒的DNA可以进入到肝脏细胞的细胞核内。而乙型肝炎病毒的持续存在主要是依赖于其共价-闭合-环状的DNA(cccDNA)可以定位于所侵染的肝细胞内，并与组蛋白相互结合后能够形成所有病毒RNA转录的模板。目前针对乙型肝炎病毒cccDNA的清除仍面临着重大的挑战（现阶段有关HBV的研究大多集中在如何抑制或破坏HBVcccDNA合成上，后续我们也将为大家讲解这方面文章的详细内容）。

HBV的感染进程可以分为三个重要的阶段：免疫耐受期、免疫活动期以及非活动期。耐受期机体的免疫系统尚未出现免疫应答，虽然患者血液中的HBeAg呈现阳性，病毒载量也常高达2×IU/mL，但肝功能维持正常。免疫活动期时，肝穿病理检查可看到患者肝脏具有明显的炎症，肝损伤指标ALT水平异常，临床上常选择该阶段进行抗病毒治疗。非活动期则通常被认为患者在接收一段时间的抗病毒治疗后，血液中病毒载量恢复到正常水平（小于IU/mL），ALT及肝穿检测肝损伤程度明显降低。

机体的免疫应答反应在HBV发生发展过程中发挥至关重要的作用。当机体感受到病毒入侵时，固有免疫细胞浆细胞样树突状细胞(pDCs)、自然杀伤细胞(NK)会释放抗病毒效应分子干扰素IFN-α、IFN-γ等，启动抗病毒免疫应答。IFN家族分子目前被认为是机体抗病毒免疫应答中作用最强大的方式，它能够激活下游JAK-STAT通路，诱导上百种干扰素刺激基因(ISGs)的表达，发挥抗病毒效应功能。

目前针对HBV的治疗药物主要包括干扰素(IFN-α)和核苷类似物(NAs)。IFN-α有着多种效应功能，其能够通过下游信号诱导出一系列的干扰素刺激基因(ISGs);并有研究报道病毒的DNA能够被I型干扰素特异性的降解，主要通过外泌体途径或者DNA编辑酶(APOBEC3)等方式去活化、降解共价闭合环状DNA，同时并不产生肝脏毒性。尽管如此，IFN-α对于乙肝的临床治疗效果并不理想，HBeAg转阴率仅30%左右,HBsAg转阴率只有不到5%。核苷类似物(NAs)的作用机制则被普遍认为是能够直接抑制乙肝病毒聚合酶的逆转录酶活性。然而，该类药物治疗过程中患者可能出现耐药性以及副作用，轻易断药容易引起疾病复发，甚至爆发性肝炎的发生，也因此给患者带来了身体和经济上的双重负担，更为重要的是对于乙肝患者的HBeAg或HBsAg的血清转换效果抑制不容乐观。由于通过目前对乙肝的治疗策略尚无法完全清除乙肝病毒及cccDNA，因此需要提出更有效的治疗方案。例如，TLR激动剂，疫苗治疗，适应性T细胞治疗，或者通过抑制HBsAg的产生从而开发相应的治疗新策略。此外，由于短效干扰素注射频繁的效果欠佳，能否找到一种预测干扰素疗效的指标，提早预示患者是否适宜干扰素治疗也是值得思考的问题。

上一章我们讲到过几种肝脏疾病的动物模型，这里再给大家补充一下HBV动物模型，建立有效模拟人体内HBV复制的小鼠模型是乙肝药物筛选与评估的重要工具。除了HBV转基因小鼠模型以及人鼠嵌合肝脏小鼠模型外，下述高压注射法造模是最易操作，且周期较短的模型，推荐给大家。

高压注射病毒表达载体：

以6-8周龄雄性小鼠为实验对象，在6-8s内通过尾静脉注射2ml含有20ugpAAV-HBV1.2质粒的磷酸盐缓冲液（PBS）。注射完毕后，将小鼠放回于笼内，多放些垫料。再于高压注射后的不同时间点进行尾静脉采集小鼠血清，定量检测小鼠外周血的HBsAg、anti-HBs、HBeAg；以及转氨酶水平等指标。高压注射构建模型一个月之后，通过放免检测血清中HBsAg水平，将含量大于ng/mL的小鼠视为构建成功的阳性小鼠。

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