论文精选广东地区猪戊型肝炎流行病学调

佟铁铸,刘星,李春萍,周宇,丁宁,罗卓军,朱事康.广东地区猪戊型肝炎流行病学调查.中国动物传染病学报,,25(4):13-18.该研究由国家质量监督检验检疫总局科技计划项目

摘要：为了调查广东地区猪戊型肝炎感染和流行情况，本研究对~年广东地区猪场抽取的血样进行抗体检测，对猪肝和粪便样品进行病毒核酸检测，PCR结果阳性的样品进行序列分析，确定所感染戊型肝炎病毒的基因型。结果显示，戊型肝炎病毒抗体平均阳性率为69.2%，PCR阳性率为46.7%，对PCR结果阳性的30株样品基因序列分析显示，29株为基因型Ⅳ型，1株为基因型Ⅲ型。

戊型肝炎（hepatitisE，HE）是由戊型肝炎病毒（HepatitisEvirus，HEV）引发的一种急性病毒性肝炎，主要通过消化道感染传播。HE是一种人畜共患传染病，猪作为主要的动物宿主，成为HEV的巨大病毒储存库，为HE的感染、传播，以及变异进化提供了充分的遗传信息资源。HE无论对养殖业还是人类的健康与生命安全都造成极大的威胁。目前，HE已被世界卫生组织（WHO）认定是发展中国家的一个重要公共卫生问题。HEV只有一种血清型，但是基因型有几种，目前认为其主要有4个基因型(基因1~4型)。其中基因3型和基因4型可以同时感染人和猪，具有人畜共患的属性，而且基因4型HEV对人的致病性较其他基因型更强，危害也更大。本研究于~年对广东地区猪场采取血样、粪便、猪肝样品，进行戊型肝炎流行病学以及基因型分析。

1样品来源~年采自广东省各地区的10个猪场的份血清样品、份猪粪便及猪肝样品，编号后冷冻送回实验室。用PBS将份猪粪便、猪肝样品制备成10%的悬浮液，于4℃、×g离心15min，收集上清液，于-70℃保存备用。

2引物设计与合成从GenBank中提取基因3、4型HEV全基因序列12个（见表1），利用ClustalX软件进行序列分析比对后，于ORF2近5端的共同保守区~nt片段设计一套兼并引物，其理论扩增片段大小为bp。

外引物：EXF:5-AAYTCTTACACTAATACACCTTA-3；

EXR:5-GAGTAGAACAGCTGACC-3；

内引物：INF:5-CTTGATTTTGCGCTAGAGCT-3；

INR:5-CCAGCCGACGAAATRAATTC-3；

其中，R=A/G；Y=C/T。

表1用于引物设计的HEV参考毒株

Table1HEVreferencestrainsusedforprimerdesign

3引物的同源性和特异性分析外引物EXF5端第9、12碱基是基因3型和基因4型的主要变异位点，EXR引物5端6、9碱基也是高变位点。内引物INF、INR在基因Ⅲ、Ⅳ型序列中保守，能够与12条基因Ⅲ、Ⅳ序列很好配对。因此，该兼并引物可以适用于检测基因Ⅲ、Ⅳ型HEV序列。同时，为了检验引物的特异性，将这4条引物与GenBank数据库进行BLAST分析，并未发现能配对非HEV序列，表明此引物的特异性较好。

图1引物与12条HEV全基因序列的同源比较

Fig.1Thehomologous