高灵敏度HBVDNA检测指导慢性乙型肝炎

为探求核苷（酸）类药物安全停药的相关指标，本研究对于国产试剂HBVDNA低于检测下限的慢性乙型肝炎（chronichepatitisB，CHB）患者在停药前进行了高灵敏HBVDNA检测。在研究过程中，发现应用cobasAmplicor系统检测高灵敏HBVDNA对于HBVDNA低载量CHB患者更具意义。为探讨高灵敏HBVDNA检测在HBVDNA低载量患者中的应用，本研究对例应用国产试剂检测HBVDNA低于检测线的血清应用cobasAmplicor系统再次检测并与HBsAg定量进行相关性分析，现报道如下。

资料与方法

一、研究对象

收集年12月至年6月于本院门诊或住院治疗的共例患者的临床资料。所有患者均符合我国版《慢性乙型肝炎防治指南》（以下简称指南）诊断标准。其中应用核苷（酸）类似物拟停药慢性乙型肝炎患者（简称拟停药组）例，符合指南推荐停药指征。有肝脏炎症活动或肝脏硬化证据，即ALT大于ULN且年龄＞40岁者；肝组织学显示KnodellHAI≥4，或炎症坏死≥G2，或纤维化≥S2，或经Fibroscan检测肝脏弹性值（liverstiffnessmeasurement，LSM）≥9.4kPa；或动态观察发现有疾病进展的证据如脾脏增大等。未进行抗病毒治疗的CHB或乙型肝炎肝硬化患者（简称拟用药组）48例。所有患者应用国产试剂检测HBVDNA均低于检测下限（＜IU/ml）。

二、仪器与试剂

HBVDNA定量检测试剂A为国产实时荧光定量PCR试剂盒，应用MxP型荧光定量PCR仪（美国安捷伦/AgilentTechnologies）。试剂B（Roche分子诊断公司）应用cobasAmplicor系统，试剂A采用煮沸法而试剂B采用磁珠法提取核酸，且试剂B具有内标。HBsAg定量检测仪器系美国雅培公司的i免疫发光检测系统，诊断试剂由雅培公司提供。

三、方法

将应用试剂A检测结果低于检测下限（＜IU/ml）的份血清标本采用试剂B再次进行检测，具体操作和结果判定参照试剂盒说明书进行。同时对所收集的标本进行HBsAg定量检测。

四、统计学处理

将测得的各组HBVDNA定量及HBsAg的浓度（IU/ml）进行对数转换，并以x±s表示，以HBsAg浓度的对数为横坐标，HBVDNA定量值对数为纵坐标，进行相关分析。采用SPSS13.0统计软件将数据作四格表χ2检验和成组t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

结果

一、国产试剂检测HBVDNA＜IU/ml的标本应用cobas试剂检测结果试剂A检测HBVDNA低于检测下限（＜IU/ml）的份标本经试剂B再次检测，其中52例（32.50%）患者的血清标本HBVDNA＞IU/ml；高于高灵敏度HBVDNA检测下限（20IU/ml）的标本共份（占71.88%）。拟停药组患者中HBVDNA≥20IU/ml者72例（64.29%）；拟用药组中19例患者HBVDNA＞IU/ml，≥20IU/ml者43例（89.58%），详见表1。

二、cobas试剂检测不同HBVDNA载量组HBsAg定量结果

应用cobas试剂检测HBVDNA不同载量组与HBsAg浓度对数值均呈显著正相关（P＜0.01），详见表2。

讨论

本研究中，试剂A检测HBVDNA＜IU/ml的份标本经试剂B再次检测有52份标本HBVDNA＞IU/ml，如以试剂B为参照，则试剂A有32.5%标本出现假阴性，提示在低HBVDNA载量时试剂B与试剂A相关性较低，与倪俊明等研究结果一致。

HBVDNA检测结果的假阴性会延误部分患者的抗HBV治疗时机。如对失代偿期肝硬化患者抗病毒治疗，我国指南提出只要HBVDNA可检测到，就可以应用核苷（酸）类似物进行治疗。与年版AASLD指南观点类似。《慢性乙型肝炎抗病毒治疗专家共识》指出代偿期肝硬化患者若检测到HBVDNA，即使ALT水平正常也应考虑给予治疗，与国内外学术界认为对于肝硬化患者抗病毒治疗应更为积极的观点一致。对HBV相关肾小球肾炎（hepatitisBvirusassociatedglomerulonephritis，HBV-AG）等CHB特殊患者，《慢性乙型肝炎特殊患者抗病毒治疗专家共识》建议HBVDNA可检出的患者均应考虑核苷（酸）类似物抗病毒治疗。另外，对年龄＞40岁，或有肝硬化、肝细胞癌家族史的CHB患者也给出了同样建议。临床上常见到一些CHB、肝硬化患者肝脏炎症或肝纤维化程度持续进展，但因应用国产试剂检测HBVDNA＜IU/ml，而未得到及时治疗。本研究证实了这一点，即使以IU/ml作为HBVDNA检测下限，亦有39.58%（19/48）的患者未得到及时抗HBV治疗，增加了这部分患者病情进展的风险。如果按HBVDNA＞20IU/ml作为HBVDNA阳性，本研究中拟用药组89.58%的患者可能有不同的预后。

另一方面，HBVDNA假阴性还可能误导部分CHB患者不规范停药。本研究中拟停药组HBVDNA＞20IU/ml者占64.29%。按欧洲肝病学会慢性乙型肝炎临床管理指南意见，尚未达到抗病毒治疗理想目的，该指南认为慢性乙型肝炎抗病毒治疗应将HBVDNA降至尽可能低的浓度，理想是低于实时定量PCR方法（灵敏度10～15IU/ml）的最低检出限。CHB患者考虑停用核苷（酸）类药物时，HBVDNA检测下限应理解为高灵敏HBVDNA检测结果。其实早在美国肝病学会（AASLD）《年慢性乙型肝炎防治指南》即建议用高灵敏的定量PCR试剂准确检测血清HBVDNA，且推荐使用RochecobasTaqManHBVDNA检测试剂。庄辉等也提出在判断停药指征时，应强调使用高灵敏度的核酸扩增试剂。

Liang等研究认为停药时血清HBsAg水平对获得持久应答具有高度预测作用，本研究结果提示cobas试剂检测HBVDNA不同载量分组与HBsAg定量值均呈显著正相关（P＜0.01）。因此，应用高灵敏度HBVDNA检测指导CHB患者停用核苷（酸）类药物更加重要。

总之，精确的定量检测对指导CHB或乙型肝炎肝硬化患者初始抗病毒治疗或停药均有重要意义。cobasAmplicor系统等高灵敏度HBVDNA检测具有很好的灵敏性。本研究提示对国产试剂检测HBVDNA低载量患者进一步行高灵敏HBVDNA检测，可更好地指导患者初始应用或停用核苷（酸）类药物。

本文选自：中华实验和临床感染病杂志(电子版)

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