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乙型肝炎病毒细胞驱动的外泌体
文章来源：乙型病毒性肝炎 发布时间:2017-9-8 11:07:34 点击数： 次
乙型肝炎病毒（HBV）感染是全世界的主要健康问题。最近的证据表明，某些病毒可以通过包装具体的病毒，成体细胞成分和由不同细胞分泌的小尺寸纳米（30-nm）小泡操纵感染过程。然而，HBV复制产生的外来细胞含量的影响还没有完全划定。在这项研究中，一个病毒诱导细胞株HepAD38进行直接比较的exosomes蛋白含量分泌有或无HBV复制HepAD38细胞变化。外泌体从HepAD38细胞培养或无强力霉素（Dox）和上清液分离纯度确认由透射电子显微镜（TEM）和Western免疫印迹检测。离子强度为基础的无标记的LC-MS/MS定量技术应用于HBV复制HepAD38细胞[简称分析exosomes蛋白含量（DOX）-外]和[简称细胞HBV非复制HepAD38（DOX）-外]。共有的外来体蛋白组分进行了鉴定，其中35种蛋白质的丰度显著改变HBV复制。引人注目的是，5亚基蛋白26S蛋白酶体复合物，包括psmc1，两，psmd1，psmd7和psmd14在HepAD38始终加强（DOX）-外。微分exosomal蛋白质的生物信息学分析证实参与蛋白酶体降解过程成分显著富集。蛋白酶体活性实验进一步表明HepAD38（DOX）-EXO有增强的蛋白水解活性与HepAD38（DOX）-外。此外，人外周血单个核细胞孵育HepAD38（DOX）-外诱导水平显著降低IL-6的分泌以HepAD38IL-6水平比较（DOX）-外。在外来的蛋白酶体活性不可逆抑制IL-6的细胞恢复较高的生产，这表明以HepAD38蛋白酶体亚基蛋白传输（DOX）-EXO可能调节受体的单核细胞促炎性分子的生产。这些结果显示，在HBV复制产生的exosomes的组成和潜在的功能，因此对外来病毒宿主相互作用提供了新的视角。
FigureS1实验数据分析协议流程图（整体流程）
FigureS2以HepAD38HBV核心蛋白免疫印迹检测（阿霉素+/阿霉素-）使用抗核心抗体外体和全细胞裂解液。结果证实了非标记定量质谱数据揭示富集的核心蛋白在HBV复制HepAD38分泌exosomes的。
FigureS3稳定转染，多西环素诱导的绿色荧光蛋白表达HepG2细胞株（HepG2）构建慢病毒载体。绿色荧光蛋白在HepG2细胞中的表达是受四环素调控的启动子，这是抑制强力霉素（DOX）。当从培养基中除去DOX，细胞启动GFP的表达，它可以通过荧光显微镜监测。
（A）荧光显微镜法检测阿霉素或阿霉素体外培养的HepG2细胞。
(B)蛋白印迹检测HepG2细胞中有或无阿霉素的GFP表达。
FigureS4人肝细胞外泌体数据集的维恩图
TableS2的外来体蛋白标志物在这项研究中确定的名单。
TableS3在HepAD38exosomes.确定的26S蛋白酶体亚基名单
TableS4参与免疫效应的过程，分析了GO富集分析的HepAD38exosomal蛋白名单。
总体而言，本研究采用高度敏感的LC-MS/MS分析以HepAD38细胞支持严格控制的方式HBV复制相结合，我们发现exosomes分泌肝细胞含有大量参与各种生物过程的蛋白质。肝细胞脱落的外泌体是一种有价值的关于细胞内通讯信息源在肝脏微环境。更重要的是，我们的研究表明，一些细胞蛋白存在于HepAD38水平分泌的exosome可以通过HBV复制调制。特别是，我们发现蛋白酶体亚基蛋白特有的形式加载到HBV复制HepAD38细胞体和可调节的受体细胞促炎性分子的生产。根据我们的研究，这是合理的假设，HBV改性体能传达信号给免疫细胞，可能介导跨细胞通讯和细胞免疫调节。这可能是一个重要的机制，通过HBV维持在宿主肝持续感染。
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