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BriCyteE6流式细胞仪

文章来源：乙型病毒性肝炎发布时间:2020-1-6 15:27:35 点击数：次

固定光路，无需频繁调整

专利的广角度无缝耦合设计，显著提高弱荧光信号的检测能力

可插拔滤光片，支持不同荧光素搭配

自动进样机型

手动进样机型

采用样本流“双闭环”控制专利技术，压力和流量的双重精确控制，同时实现淋巴细胞亚群TBNK单平台直接绝对计数

高灵敏度检出弱表达样本和稀有细胞

智能温控、工作环境15-32度

中文操作界面

支持条码扫描*（*选配）

双向LIS直接传输

液位实时监控、残余量少

一键式故障消除

手动进样

支持微量离心管上样

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携带污染率小于0.1%

淋巴亚群单平台直接绝对计数

无须额外粒子耗材

最大粒子采集速度

16,粒子/秒

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测量参数

面积/A、宽度/W、高度/H、时间/T、自定义

自动进样

40管转盘式连续进样，样本自动混匀

最快检测速度：90测试/小时

淋巴细胞TBNK分群自动化软件

HLA-B27检测自动化软件

全自动质控模块，自动生成L-J曲线

自动电压调节

自动补偿调节

一步还原、适合科研的随时调整与纠正

流式细胞仪临床应用

——风湿免疫科

疾病概要

风湿性疾病是指一大类病因各不相同,但均累及关节及其周围组织的疾病。临床

常见的风湿性疾病有四大类:弥漫性结缔组织病、脊柱关节病、骨关节炎和晶体性关节炎。流式细胞仪在结缔组织病和脊柱关节病的诊断和治疗等方面发挥了重要作用。

淋巴细胞亚群、HLA-B27及其功能

淋巴细胞大致分为T细胞(CD3+)、B细胞(CD19+)和NK细胞(CD16+56+)三

个亚群。此外根据是否表达CD4和CD8,还可以将T细胞进一步划分为辅助/诱导T细胞(CD4细胞)和抑制/细胞毒T细胞(CD8细胞)。不同淋巴细胞具有不同的生理功能,它们之间相互协调,共同承担抵御外部病原体入侵、监控内部正常免疫功能的重任。

HLA是指人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen)基因复合体,主要功能是以其产物(HLA)提呈抗原肽进而激活T淋巴细胞。HL.A-B27基因位于I类HLA的B基因座上,其产物为HLA-B27抗原(简称HLA-B27)。HLA-B27与脊柱关节病:(SpA)的易感性密切相关。

流式细胞仪在风湿性疾病中的应用

疾病诊断

过去,中轴SpA的诊断主要有以下2个标准:(1)年修订的纽约标准和(2)年欧洲脊柱关节病研究组(ESSG)标准。但两个标准均以X放射线为主要证据,导致早期患者不宜被确诊。

年国际脊柱关节病评估工作组(ASAS)提出了新的中轴SpA诊断标准,其中增加了HLA-B27和MRI作为重要的诊断指标,使早期患者确诊的敏感性大幅提升。

未分化SpA(USpA)是指有脊柱关节病的某些临床特点,而又未能分类为某种明确的脊柱关节病的一类SpA。由于这类疾病的临床特征不典型,因此误诊率较高。而在诊断方面性能,B27的作用要优于核磁共振(MRI)。

免疫功能评估

很多风湿性疾病常呈现TBNK失衡的现象。类风湿关节炎(RA)患者常表现为高CD4细胞、低CD8细胞和高CD4/CD8比值;

系统性红斑狼疮(SLE)患者常表现为低CD4细胞、高CD8细胞和低CD4/CD8比值,且这种变化与病情严重程度相关。高活动期患者,CD4细胞和CD4/CD8比值降低、CD8细胞升高更为明显。

系统性硬化症(SSc)患者常表现为CD4细胞、CD8细胞和B细胞绝对值均降低。

强直性脊柱炎(AS)患者常表现为CD3细胞、CD8细胞、NK细胞降低，B细胞增加,但CD4细胞变化不大。

干燥综合征患者常表现为CD3细胞、CD4细胞和CD4/CD8比值下降,CD8细胞上升。

疗效监测

RA、SLE等风湿性疾病常使用激素、细胞毒药物等药物进行治疗。治疗有效时,CD4细胞、CD8细胞和CD4/CD8比值失衡的现象往往恢复正常。

RA、SLE采用美罗华(一-种单抗药物)治疗时,需要定期检测B细胞的绝对值。B细胞绝对值降低至3-5个/μL,说明治疗效果较好。

干燥综合征经免疫调节剂治疗后,CD3细胞、CD4细胞和CD4/CD8比值回升,CD8细胞下降,免疫失衡状态得到纠正。

不良反应监控

细胞毒药物是治疗风湿性疾病的一线药物。但这类药物具有较强的骨髓抑制作用,因此在治疗过程中应定期检测各淋巴细胞亚群数量,以监测病人的免疫功能。若免疫细胞数量低于正常值,临床应考虑预防性使用骨髓刺激药物和抗生素。

美罗华在治疗RA、SLE的过程中,部分患者在B细胞下降的同时,T淋巴细胞也会下降。通过淋巴细胞亚群检测，可监测美罗华治疗过程中CD4细胞的水平。若出现CD4细胞低于个/μL,需要医生考虑预防性使用抗生素或改变治疗方案,以防机会性感染的发生。

疾病预测

干燥综合征(pSS)淋巴肿瘤的发生率远远高于正常人群。低CD4细胞%、高CD8细胞百分比以及低CD4/CD8比值的患者发生恶性淋巴瘤的几率更高。通过TBNK检测可以及早发现这类患者,及时采取有针对性的治疗。

与B27阴性的SpA患者相比,B27阳性患者炎性背痛发生较早,延误诊断较少,银屑病发生率低,骶髂关节MRI炎症、脊椎MRI炎症和X线骶髂关节炎发生频率较高,患者发病年龄较小,对非甾体抗炎药(NSAIDs)反应也较B27阴性患者为好,并发系统性疾病(如AS)的比例明显增高。

——妇产科

概要

妇产科学包括产科学、妇科学和计划生育,涉汲的疾病包括病理妊娠、妊娠合并

症、异常分娩、分娩期并发症、女性内分泌疾病、妇科肿瘤、女性生殖器炎症、女性生殖器损伤及畸形等。流式细胞仪在复发性流产的诊断以及妇科肿瘤的治疗和预后判定等方面可以发挥重要作用。

流式细胞仪在妇产科疾病中的作用

复发性流产

复发性流产(RSA)是指连续发生2次或2次以上的自然流产,发病原因除少数为

生殖内分泌、染色体及生殖器官解剖学异常外,因免疫调节异常所致。

免疫功能评估

RSA患者的外周血CD4细胞百分比、CD4/CD8比值升高,反映出患者T淋巴细胞免疫功能发生了紊乱。

原因不明RSA患者的外周血NK细胞百分比明显升高,这可能与NK细胞对胚胎的杀伤增强有关。

疾病诊断

原因不明的RSA患者,其NK细胞百分比常大于某一阈值(如12%)。NK细胞增高用于预示RSA患者发生流产时,具有较高的敏感性和特异性。

封闭抗体(Blockingantibody,BA)又称为抗丈夫淋巴细胞细胞抗体,是人类白细胞抗原、滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原等刺激母体免疫系统所产生的一类IgG抗体。妊娠时胚胎所携带的父源性HL.A抗原能刺激母体封闭抗体。它能断母体细胞毒性T细胞对胚胎发动免疫攻击,发挥保护胎儿、维持妊娠的作用。临床上以封闭抗体缺乏为主要特征的复发性流产者较为常见,进行封闭抗体检测可以帮助医生尽早发现这类患者。

疗效观察

RSA患者经淋巴细胞主动免疫治疗后,CD4细胞百分比、CD4/CD8比值明显下降,这种变化有利于再次妊娠。

RSA患者经淋巴细胞主动免疫治疗后,其NK细胞百分比明显降低,妊娠结局也发生变化。

RSA患者经淋巴细胞主动免疫治疗后,外周血中的CD3、CD4和CD8封闭抗

体会由阴性转换为阳性,获得治疗成功率可达到78%-80%。

妇科肿瘤

诊断和鉴别诊断

以CD4/CD8比值1.2、CA-U/mL为阳性标准,联合使用两个指标检测卵巢恶性肿瘤,可以提高检出的敏感性和特异性。

卵巢良性肿瘤和子宫肌瘤患者,其CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值与健康对照者没有差异。

卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌患者,其CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值明显下降,显示了免疫功能受抑制的状态。

肿瘤分期

与早期卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌患者相比,晚期患者CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值和NK细胞下降更为明显。

乳腺癌等实体肿瘤患者,CD4/CD8比值降低。但早期患者多由CD8细胞增多所致,而晚期患者多与CD4细胞降低有关。

疗效监测

在I、1期卵巢癌术后无残留灶患者,术后3-6周外周血淋巴细胞亚群可恢复正常。

在晚期小残留卵巢癌术后灶(直径2cm)患者,T细胞百分比和绝对值均明显增加,NK细胞较少。但在大残留灶(直径2cm)患者,T细胞百分比和绝对值均明显减少,NK细胞仍同术前。

预后判定

宫颈癌放疗后,复发患者的CD4细胞和CD4/CD8比值常比未复发患者明显

减少,且持续处于较低水平,甚至早在治疗前复发者即显示低值。

乳腺癌转移患者，CD4/CD8比值较未转移者明显降低,且转移者多以CD4单独减少为常见。

其他妇科疾病

盆腔炎性疾病患者CD4细胞、CD4/CD8比值常呈降低趋势,且与患者病程、孕产次数、月经周期等相关。随着病程和孕产次数的增加,T淋巴细胞失衡的危险性会增加,且在经期更易致T淋巴细胞亚群失衡。

原发性痛经患者月经期、卵泡期CD4细胞百分比及CD4/CD8比值显著下降,CD8细胞百分比增高。

与未孕妇女相比,正常孕妇体内存在CD8细胞百分比增高、CD4细胞百分比和CD4/CD8比值下降的现象;妊高征患者随病情加重,CD8细胞逐渐降低,而CD4细胞和CD4/CD8比值呈现逐渐升高的趋势,重度患者各项指标接近正常未孕妇女水平。

——-感染病科

概要

感染病是指能在正常或非正常人群中流行的疾病,通常系各种致病或条件致病的病原微生物弓

起。根据传播特点可进一步分为:呼吸道感染病(如流感)、消化道感染病(如菌痢)、血液感染病(如艾滋病)、虫媒感染病(如疟疾)、体表感染病(如沙眼)等。流式细胞仪在感染病的诊断、治疗和预防等方面可以发挥重要作用。

流式细胞仪在感染病中的应用

免疫功能评价

免疫状态失衡常与疾病病情加重相关。

与健康人群或普通肺炎相比,H1N1流感病毒导致的严重肺炎患者,CD4细胞下降,CD8细胞上升,CD4/CD8比值倒置。

与健康对照和中度急性胰腺炎相比,重度急性胰腺炎患者CD4细胞和CD4/CD8比值明显下降。

乙肝患者病毒载量高会导致免疫功能下降，常表现为CD3细胞、CD4细胞下降,CD8细胞上升,CD4/CD8比值倒置。

与初发尿路感染相比,反复发作尿路感染者CD4细胞、CD4/CD8比值降低CD8细胞.上升。

与轻度慢性乙肝患者相比,重度肝炎患者CD3细胞、CD4细胞、CD8细胞、B细胞和NK细胞均降低。

疾病诊断

原发性免疫缺陷病是由于免疫系统先天性发育障碍所致的--组综合征,常见临床症状是反复感染。该病可分为:体液免疫缺陷(B细胞缺陷)、细胞免疫缺陷(T细胞缺陷)、联合免疫缺陷(B细胞和T细胞同时缺陷)、吞噬细胞缺陷、补体缺陷五种类型。淋巴细胞亚群检测在B细胞缺陷、T细胞缺陷、B细胞和T细胞联合缺陷疾病的诊断和鉴别诊断中发挥着非常重要的作用。

CD4是HIV/AIDS诊断的重要依据。例如,进行性HIV感染的诊断标准包括:(1)I期和IV期临床症状和/或(2)CD4细胞/uL。又如,成人及15岁以上青少年符合以下一项者即可诊断为艾滋病:(1)CD4细胞/mm3;(2)有IV期的临床表现。

EB病毒弓发的传染性单核细胞增多症,血象中异性淋巴细胞增多,多为T淋巴细胞,且以CD8细胞为主,淋巴细胞亚群检测可以辅助传染性单核细胞增多症的诊断。

脓毒症患者体内存在细胞免疫功能紊乱的现象,常表现为CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值降低,淋巴细胞亚群在诊断脓血症方面具有较高的敏感性和特异性。

治疗监测

CD4细胞计数是HIV感染/AIDS抗逆转录病毒治疗(ART)监控的重要依据。CD4细胞/uL是启动抗抗逆转录病毒治疗的关键指标。同时,抗逆转录病毒治疗过程中也需要定期监测CD4细胞水平。CD4细胞数量上升并恢复至/ul表明治疗有效。但若持续维持在/uL的低水平,则预示治疗效果不佳,需要更改治疗方案。

一-些病毒感染患者,在发病初期常表现为CD3细胞、CD4细胞、CD8细胞下降,经有效治疗后,细胞数目恢复正常。

预后判定

与非死亡患者相比,H7N9流感死亡患者CD4细胞和CD8细胞在治疗过程中变化波动较大,下降幅度也更为明显。

慢性乙型重症肝炎患者,若CD/μL、CD8/μL,继发感染率明显升高。

重症肝炎患者,常表现为CD3细胞、CD4细胞、CD8细胞数量均降低,持续降低者预后不佳。

感染的预防

医院获得性感染和社区获得性肺炎患者,常合并免疫功能低下。临床医生可以通过淋巴细胞亚群数量监控易感人群的免疫功能,及时纠正或改善免疫缺陷状态。

64岁-岁的老年人,因股骨颈骨折而进行关节成形术时,与未发生肺炎者相比,发生术后肺炎者的CD4+、CD8+细胞均降低,因医院获得性感染的发生。

慢性阻塞性肺病(COPD)患者,其CD4+细胞(左)、CD4/CD8比值下降(中),NK细胞数量上升(右),反映了慢性疾病患者免疫功能的下降应注意预防社区获得性肺炎的发生。

——老年科

概要

老年病多指60岁以上老年人罹患的、但非老年人特有的疾病。常见病包括:涉及呼吸系统的慢性阻塞性肺部疾病、肺心病、肺炎等,涉及心血管系统的动脉粥样硬化、冠心病、高血压等,涉及消化系统的胃炎、消化下溃疡、便秘等,涉及泌尿系统的肾功能衰竭、肾小球肾炎、尿路感染等,涉及内分泌的糖尿病、高血脂、骨质疏松等，涉及脑血管的脑梗死、脑出血、帕金森等,涉及外科手术的—些疾病。流式细胞仪在老年人身体状况评估、疾病的治疗监控和预后判定等方面可以发挥重要作用。

流式细胞仪在老年病中的作用

免疫功能评估

随着年龄增长,老年人的淋巴细胞亚群也在发生变化,其CD3细胞、CD4细胞、CD8细胞、B细胞较青年人降低，NK细胞较青年人高,反映了老年人特异性免疫能力的下降。

老年人免疫学预警指标(IRP)可用于老年人免疫功能状况的评估,对疾病的发风险给予提示。免疫学预警指标阳性的表现为:CMV血清阳性以及以下淋巴细亚群的变化:如CD4/CD8比值1.0,B细胞减少,T细胞增殖水平降低等。

老年患者IRP阳性常预示较高的死亡率。

社区60岁以上老年人IRP阳性,提示免疫功能下降,机体活动能力和部分认知能力(记忆力和语言能力等)下降。

住院老年患者院内肺部感染与IRP指标相关,IRP医院获得性肺炎的几率显著高于IRP阴性老年患者。

免疫功能紊乱与疾病

免疫老化所致的免疫紊乱,是导致心脑血管疾病、肿瘤、感染等老年性疾病的重要因素。

呼吸系统疾病

老年细菌性肺炎患者,往往表现为CD8细胞水平升高,CD3细胞、CD4细胞、NK细胞和CD4/CD8比值降低。经有效治疗后,CD8细胞降低,CD3细胞、CD4细胞以及CD4/CD8比值逐渐恢复。

老年慢性阻塞性肺病(COPD)患者在急性发作期和稳定期时免疫功能会下降,常表现为CD3细胞、CD4细胞降低,CD8细胞升高、CD4/CD8比值倒置。

医院获得性肺炎患者常表现为CD3、CD4、CD4/CD8比值下降,且和疾病严重程度存在相关性。

老年肺心病急性发作期患者,CD4/CD8显著下降。随着感染的控制、病情的缓解,CD4/CD8水平趋向正常。

心脑血管疾病

急性心肌梗死老年患者,CD3和CD8细胞显著降低,CD4/CD8比值明显增高。经有效治疗后,CD3和CD8细胞显著升高,CD4/CD8比值明显下降。

慢性心力衰竭患者,CD3细胞、CD4细胞、B细胞、NK细胞降低,CD8细胞升高,CD4/CD8比值下降。常规治疗加免疫调节治疗后,免疫失衡现象得到纠正,治疗效果优于单纯常规治疗。

急性脑梗死老年患者CD4细胞、CD4/CD8比值降低，CD8细胞明显升高。急性脑梗死患者第3天外周血CD4细胞和CD4/CD8比值越低,其近期预后也越差。

中风后发生感染的患者,常表现为低的CD3、CD4和CD8细胞。中风后好的临床转归病人,其B细胞较高;而坏的临床转归患者,常表现为低的B细胞数量。

肿瘤

老年肺癌患者与肺部良性疾病患者相比,CD3细胞、CD4细胞、NK细胞以及CD4/CD8比值下降,CD8细胞升高,且随着TNM肿瘤分期升高上述变化越发显著。

老年晚期恶性肿瘤患者经免疫增强剂治疗后,CD4细胞以及CD4/CD8比值均明显上升,患者生活质量也显著提高。

内分泌疾病

老年糖尿病患者,CD4/CD8比值降低,反映其免疫功能低下。同时,CD4/CD8比值还可以反映血糖控制状况,控制良好者CD4/CD8比值较高。

老年代谢综合征患者,CD4/CD8比值降低。经阿托伐他汀治疗后,CD4/CD8比值增高,提示治疗可以减轻免疫抑制趋势,改善免疫功能紊乱状态。

外科术后感染

心脏手术后,年龄越大的老年患者(如75岁)总淋巴细胞数、CD3细胞数和B细胞数越低(与60岁的老年患者比较),提示高龄老年患者术后免疫功能低下,应严密监测淋巴细胞亚群数量,预防感染的发生。

进行关节成形术的老年患者,免疫功能低下时易诱发感染。如术后合并肺,炎的病人常表现为CD4细胞、CD8细胞和B细胞减少;术后发生泌尿系统感染的病人常表现为CD4细胞、CD8细胞降低,淋巴细胞亚群百分比降低是术后感染的一个重要危险指标。

老年低危患者骨科手术后,CD3、CD4、CD8细胞以及CD4/CD8比值下降,但术后14天后基本恢复到术前状态。相反,高危患者术后14天后，各细胞亚群和CD4/CD8比值仍维持较低水平。T淋巴细胞亚群检测有利于术后免疫功能恢复的监控,对预后判定也有帮助。

——移植中心

概要

医学上应用自体或异体的正常细胞、组织、器官置换病变的或功能缺损的细胞、组织、器官,以维持和重建机体生理功能,这种治疗方法称为细胞移植、组织移植或器官移植。移植术后,受体免疫系统可识别移植物抗原并产生应答,移植物中免疫细胞也可识别受者组织抗原并产生应答,称为移植排斥反应。流式细胞仪在造血干细胞移植前的预处理、急性排斥反应的诊断、免疫抑制治疗的监测、并发症和预后的监控等方面可以发挥重要作用。

流式细胞仪在移植中的应用

造血干细胞预处理移植前,移植物需要进行T细胞、B细胞去除,以预防移植物抗宿主反应,淋巴细胞亚群检测可用于移植物T细胞、B细胞移除效率的监测。移植前,受者需进行清髓性预处理或非清髓性预处理,淋巴细胞亚群检测可用于预处理效果的监测。急性排斥反应的诊断和鉴别诊断

CD4细胞是参与移植排斥反应的主要细胞。当监测器官移植排斥反应时,CD4/CD8比值升高预示免疫功能相对活跃,机体可能发生排异反应。肾移植患者发生急性排斥反应时,往往出现CD4/CD8比值增高;而CMV感染患者CD4/CD8比值降低,甚至倒置。监测CD4/CD8比值可用于急性排斥反应和CMV感染的鉴别诊断。肾移植患者发生急性排斥反应时,往往出现CD4/CD8比值增高;而发生免疫抑制剂环孢菌素A中毒时,CD4/CD8比值与正常者相似。监测CD4/CD8比值,有助于急性排斥反应和免疫抑制剂中毒的鉴别诊断。传统的肝功能指标(ALT、AST、ALP、胆红素等)在诊断肝移植急性排斥反应时具有较高的敏感性,但特异性较差。与之相反，CD3、CD4在监测肝移植急性排斥反应方面具有很高的特异性,但敏感性稍差。将肝功能指标与T淋巴细胞亚群相结合,可以提高肝移植急性排斥反应的诊断性能。肝移植术后,CD3和CD4百分比不降反升,往往提示患者可能对移植物存在排斥反应。肺泡灌洗液淋巴细胞亚群检测也可用于急性排斥反应的诊断。肺移植后产生排斥反应的患者,肺泡灌洗液中CD4细胞降低、CD8细胞升高、CD4/CD8比值降低。疗效监测T淋巴细胞亚群检测可作为移植后疗效监测的重要依据。肾移植术后发生急性排斥反应时,CD3、CD4细胞及CD4/CD8比值均升高。经激素冲击治疗后,治疗有效的患者CD3、CD4细胞及CD4/CD8比值逐渐下降,而无效患者的百分比和比值仍居高不下。肾移植术后发生CMV感染的患者,撤减免疫抑制剂并使用抗病毒药物和免疫增强剂治疗后,CD4细胞和CD4/CD8比值均上升,且死亡率较未用免疫增强剂治疗组明显增高。免疫抑制治疗监控可降低排斥反应的发生率。例如,将CD4细胞绝对值控制在-个/uL,或术前水平的60%-80%,会使急性排斥反应发生率下降。

TBNK检测是监测造血干细胞移植(HST)后免疫功能重建的重要指标。各细胞亚群恢复正常或接近正常,常被看做是免疫功能重建成功的标志。并发症和预后监控?免疫抑制剂抗排斥作用的同时,也会对受者产生各种毒副作用,影响人体免疫系统,导致感染或新发肿瘤等并发症的发生。通过淋巴细胞亚群检测,临床医生可以及时发现高危患者,并采取相应的预防措施。肾移植患者术后常表现为CD4细胞绝对值低下,患泌尿生殖系统肿瘤的风险显著升高。特别是年龄较大的肾移植患者,CD4细胞和B细胞的绝对值降低更为明显,更易诱发肿瘤。肾移植术后发生巨细胞病毒(CMV)感染合并急性呼吸窘迫综合症时,存活组在治疗后CD4、CD8细胞以及CD4/CD8比值不断升高,而死亡组CD4、CD8细胞以及CD4/CD8比值一直维持在较低水平,淋巴细胞亚群检测可作为临床转归的预测指标。肾移植后发生机会性感染患者,CD4细胞绝对值低于术前和普通感染患者。而普通感染患者,CD4细胞绝对值和CD4/CD8比值均在正常范围。肾移植患者,使用免疫抑制剂的同时加用免疫球蛋白治疗后,CD4细胞迅速恢复正常水平,肺部感染发病率也较未使用免疫球蛋白治疗的患者大幅降低。经抗胸腺细胞球蛋白(ATG)治疗的肾移植患者,CD4细胞大于等于0.05x/uL,发生机会性感染和CMV相关疾病的几率会明显降低。造血干细胞移植后,NK细胞、B细胞通常在6-9个月恢复正常。NK细胞绝对值恢复得越快,维持在高水平时间越长,移植后患者死亡率和复发率下降得也越显著。若患者出现NK细胞和B细胞绝对值低下,感染风险显著增加，复发、死亡的风险也会上升。造血干细胞移植后,CD8细胞通常在9个月恢复正常。CD8细胞绝对值低下的患者,易出现死亡、复发或移植物失效的结果。造血干细胞移植后,CD4细胞恢复较慢,通常在18个月恢复正常。移植后3个月,如果患者CD4细胞绝对值/μl,则感染风险增加,整体存活率下降。

——呼吸科

概要

呼吸系统疾病是一种常见病、多发病,主要病变在气管、支气管、肺部及胸腔。常见疾病包括:急性呼吸道感染及急性气管支气管炎、慢性阻塞性肺疾病及肺心病、支气管哮喘、肺炎、肺癌、弥漫性间质性肺疾病、肺结核等。流式细胞仪在呼吸系统疾病的诊断、治疗和预后判定以及患者免疫功能评估等方面可以发挥非常重要的作用。

流式细胞仪在呼吸系统疾病中的应用

间质性肺疾病的诊断和鉴别诊断

应用纤维支气管镜对肺部组织用生理盐水进行局部灌洗，收集回收液并对其中细胞成分及有关物质进行分析,可为肺部疾病诊断、鉴别诊断的提供重要依据。肺泡灌洗液检测在弥漫性间质性肺疾病、结核病和肺部肿瘤的诊断和鉴别诊断中具有非常重要的作用。

结节病患者,肺泡灌洗液中细胞总数增加,以T淋巴细胞增加为主,且CD4.细胞、CD4/CD8比值明显升高。

外源性过敏性肺泡炎患者,肺泡灌洗液细胞总数增加,以T淋巴细胞增加为主。T淋巴细胞多数CD8细胞,故CD4/CD8比值常小于1.0。

特发性肺间质纤维化患者,肺泡灌洗液中CD8细胞增加,CD4细胞降低,CD4/CD8比值下降。

结核性和肺部肿瘤患者,肺泡灌洗液中淋巴细胞均见升高。但前者以CD4细

胞为主,而后者CD4细胞数量及CD4/CD8比值均下降。

肿瘤

良性和恶性肿瘤的鉴别

肺部良性疾病患者与健康对照者的细胞亚群和CD4/CD8比值的差异并不明

显。而肺癌患者则存在明显的免疫抑制,常表现为CD3、CD4细胞及CD4/

CD8比值降低,CD8细胞升高。

临床分期

肺癌患者分期与淋巴细胞亚群相关。期肺癌患者,T淋巴细胞亚群未见明显抑制;I期CD3、CD4、NK细胞减少;I川期肺癌患者所有亚群降低更为明显。

肺癌患者随着分期增加,CD4/CD8比值也明显降低,各期间差异均有统计学意义。

疗效监测

非小细胞肺癌患者化疗后,CD3、CD4、NK细胞以及CD4/CD8比值均明显高于化疗前,说明治疗方案对提升机体免疫功能有利。

肺癌化疗有效的患者,CD3、CD4、CD4/CD8显著增高。化疗无效者,CD3、CD4、CD4/CD8显著降低。

预后判定

肺癌淋巴结转移患者,其NK细胞和CD4/CD8比值均明显低于无淋巴结转移的患者。

CD4/CD8≥1.0的小细胞肺癌患者,其肿瘤无转移率和生存率均明显优于CD4/CD81.0的患者。

其他

呼吸道感染和支气管炎

反复呼吸道感染患儿，常表现为CD3细胞、CD4细胞以及CD4/CD8比值显:著低于健康儿童,而CD8细胞明显高于正常儿童,反映了患儿细胞免疫功能低下的状态。抗感染治疗的同时,应开展免疫调节治疗。

慢性支气管炎老年患者,常呈现CD3、CD4细胞以及CD4/CD8比值下降。经有效治疗后,CD3、CD4细胞以及CD4/CD8比值回升。

慢性阻塞性肺疾病和肺心病

慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者,其CD4细胞、NK细胞、CD4/CD8比值下降。经治疗后其CD4细胞、CD4/CD8比值、NK细胞均明显上升,表明免疫功能的恢复。

老年肺心病急性发作期患者,CD4/CD8显著下降。随着感染的控制以及病情的缓解,CD4/CD8水平趋向正常。

医院获得性和社区获得性肺炎

医院获得性肺炎患者,CD3细胞、CD4细胞和CD4/CD8比值下降,且和疾病严重程度存在相关性。经治疗后,CD4细胞、CD4/CD8比值、NK细胞明显上升,抗生素应用时间也明显缩短,死亡率明显下降。

儿童社区获得性肺炎(CAP)患者,CD4细胞、CD4/CD8比值均降低。特别是肺炎链球菌肺炎和肺炎支原体患儿,下降更为明显。

肺结核

肺结核患者CD8细胞明显增高,CD3、CD4、CD4/CD8和NK细胞均降低。经治疗后,CD3细胞、CD4细胞和CD4/CD8比值增高，CD8细胞下降,免疫功能得到恢复。

肺结核有空洞患者较无空洞者CD3和CD4细胞下降更为显著。病灶范围广泛者较范围较少者CD3、CD4细胞以及CD4/CD8比值下降更为明显。

——血液科

淋巴细胞亚群检测

淋巴细胞大致分为T细胞(CD3+)、B细胞(CD19+)和NK细胞((CD16+56)+)三

血液病的发生、发展与机体的免疫调控系统密切相关,很多恶性血液病患者均存在淋巴细胞亚群异常的现象。流式细胞术检测血液病患者外周血中的淋巴细胞亚群,在免疫功能检测、发病机制研究和疗效预测等方面可以发挥非常重要的作用。另外,淋巴细胞亚群检测还可帮助医生跟踪造血干细胞移植后免疫重建情况,监测移植相关的并发症(如急性移植物抗宿主病(GVHD)、移植物排斥反应等)的发生,有助于医生及早采取应对措施,提高移植后的生存率。

白血病/淋巴瘤免疫分型

白血病是发生于造血器官、以血液和骨髓中的白细胞及其前体细胞的增殖和发

育异常为特征的一种进行性恶性疾病。淋巴瘤是原发于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤,可分为霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤两大类,8年WHO淋巴瘤新分类中,有80个亚型。目前,临床上白血病/淋巴瘤的诊断主要结合细胞形态学、细胞免疫学、细胞遗传学、分子生物学以及临床表现进行综合判断,其中免疫分型是白血病/淋巴瘤诊断的重要依据之一。以流式细胞仪为基础的免疫分型具有快速、准确、定量等优点。结合免疫荧光技术,不但可以测定含某种抗原的细胞数,还可测定每个细胞上所含抗原的量,为了解肿瘤细胞的所属系列及其分化程度提供重要的依据。

微量残留病检测(MRD)

由于目前多种化疗药的联合应用，多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解

(CR)。即患者的骨髓中幼稚细胞5%,外周血细胞达到正常水平。但仍有相当多的患者出现复发。复发的主要原因是患者体内存在微量的、形态学难以辨认的残存白血病细胞。流式细胞法检测MRD敏感性可达到10-4,且具有准确、快速、操作简单等特点,目前已成为临床上检测MRD的主要方法。

造血干细胞检测

造血干细胞移植(HSCT)是恶性血液病有效乃至唯一根治的手段。此外,HSCT还广泛用于再生障碍性贫血、先天性免疫缺陷病、实体瘤和自身免疫病等疾病的治疗。外周血中造血干/祖细胞数量与动员方案有直接关系,而采集物中的造血干/祖细胞数量对移植的成功也有着直接影响。使用流式细胞仪检测干细胞,具有简单、快速、准确等特点,已成为临床造血干细胞计数的主要方法。

阵发性睡眠性血红蛋白尿检测

阵发性睡眠性血红蛋白尿是(PNH)是一种获得性造血干细胞基因突变的克隆性疾病。患者造血干细胞中染色体Xp22.1.上PIG-A基因发生突变,导致部分或全部血细胞膜糖化磷脂酰肌醇(GPI)锚合成障碍。目前,流式细胞术检测GPI锚连蛋白缺失的细胞数是诊断PNH最直接、最敏感最特异的方法。

——肿瘤科

概要

肿瘤是一种细胞的异常增生。这种增生除了表现为肿瘤本身的持续生长外,还表现为对邻近正常组织的侵犯和经血管、淋巴管和体腔转移到身体的其他部位临床常见的恶性肿瘤包括:肺癌、肝癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌、肾癌等。流式细胞仪在肿瘤的鉴别诊断、临床分期、疗效监控以及预后判定等方面可以发挥非常重要的作用。

流式细胞仪在肿瘤的作用

鉴别诊断

良性和恶性肿瘤患者的免疫功能状态存在差异。因此,通过淋巴细胞亚群检测有助于良性与恶性肿瘤的鉴别。

肺癌患者存在明显的免疫抑制,常表现为CD3、CD4细胞及CD4/CD8比值降低,CD8细胞升高。而肺良性疾病患者与健康对照者的细胞亚群和CD4/CD8比值的差异并不明显。

卵巢良性肿瘤和子宫肌瘤患者,其CD3、CD4细胞以及CD4/CD8比值与健康对照者没有差异。相反,卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌患者,其CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值明显下降

临床分期

处于肿瘤不同发展阶段的肿瘤患者,其免疫功能状态也存在很大不同。因此,通

过淋巴细胞亚群检测可以帮助医生确定肿瘤患者的临床分期。

肺癌患者的临床分期愈晚,外周血淋巴细胞亚群中CD3细胞、CD4细胞等免疫指标下降得愈明显。

随着卵巢癌患者临床分期增高,CD4细胞逐步下降,CD8细胞逐步升高,CD4/CD8比值随着病情加重而进一步降低。

鼻咽癌患者随分期增高,CD4/CD8比值同样有下降趋势。

子宫颈癌患者组织中存在淋巴细胞侵润,主要以CD3细胞为主,其次为B细胞，NK细胞。早期患者以CD8细胞、CD4细胞侵润为主,进展期主要以CD8细胞侵润为主。

疗效监控

肿瘤患者的免疫功能常处于被抑制的状态,而放/化疗、手术治疗的目的就是为了纠正这种免疫失衡的状态。通过淋巴细胞亚群的分类和计数,可以监测治疗后患者免疫功能恢复的动态过程,有助于医生确认治疗方案是否有效。

非小细胞肺癌患者术前进行新辅助化疗,患者CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值均显著升高,CD8细胞显著降低,提示有效的术前化疗能够改善机体免疫微环境,有利于术后恢复。

肺癌化疗有效的患者,CD3、CD4、CD4/CD8显著增高。化疗无效者,CD3、CD4、CD4/CD8显著降低。

乳腺癌化疗无效患者,治疗后CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值均较治疗前明显下降,CD8细胞较治疗前升高。

在1、I期卵巢癌术后无残留灶患者,术后3-6周外周血淋巴细胞亚群可恢复正常。

预后判断

肿瘤的复发、转移与患者的免疫功能状态密切相关。免疫状态的恢复常预示着较少的复发和转移几率,而免疫状态的恶化则预示较高的复发和转移风险。淋巴细胞亚群水平可以准确地反映患者免疫功能的强弱,因此可作为预后判断的一个有效指标。

CD4/CD8≥1.0的小细胞肺癌患者,其肿瘤无转移率和生存率均明显优于CD4/CD81.0的患者。

肺癌淋巴结转移患者,其NK细胞和CD4/CD8比值均明显低于无淋巴结转移的患者。

宫颈癌放疗后，复发患者的CD4细胞和CD4/CD8比值常比未复发患者明显减少，且持续处于较低水平,甚至早在治疗前复发者即显示低值。

食管癌发生微转移的患者,外周血CD8细胞水平明显高于无微转移患者,CD3细胞、CD4细胞及CD4/CD8比值明显低于无微转移的患者。

鼻咽癌患者治疗前的免疫功能状态与预后有关,CD4/CD8比值降低者具有更高的局部复发及远端转移风险。

淋巴细胞亚群(TBNK)检测与细胞免疫治疗

以CIK细胞免疫治疗为例,TBNK检测在整个治疗过程中可以发挥多种作用。CIK治疗前,TBNK检测可以用于患者身体状况的评估。

采集外周血单个核细胞(MNC)时,TBNK检测可用于MNC细胞和CIK细胞的纯度、比例的评估。

在细胞体外扩增阶段,TBNK检测除了用于MNC细胞和CIK细胞的纯度、比例的评估外,还可用于细胞活性状态的检测。

在回输ClK细胞治疗时,TBNK检测可用于疗效的评估。治疗有效时，患者的CD4、NK细胞增高,CD8细胞下降。

——儿科

概要

临床儿科学是研究疾病发展规律、疾病诊断与治疗、疾病康复的医学科学,其下又可分为呼吸、消化、心血管、血液、神经、肾脏、内分泌等亚专业分支。儿科学涉及的疾病包括:新生儿疾病(如新生儿感染性疾病、黄疸)、免疫性疾病(如原发性免疫缺陷病)、感染性疾病(如败血症、手足口病)、消化系统疾病(如腹泻)、呼吸系统疾病(如上呼吸道感染、肺炎)、循环系统疾病(如先天性心脏病)、泌尿系统疾病(如肾小球肾炎、肾病综合征)、造血系统疾病(贫血、白血病)等。流式细胞仪在疾病的诊断、疗效监控和预后判定等方面可以发挥非常重要的作用。

流式细胞仪在儿科中的应用

免疫性疾病

原发性免疫缺陷病是由于免疫系统先天性发育障碍所致的一组综合征,它可进一步分为:体液免疫缺陷(B细胞缺陷)、细胞免疫缺陷(T细胞缺陷)、联合免疫缺陷(B细胞和T细胞同时缺陷)、吞噬细胞缺陷、补体缺陷五种类型。淋巴细胞亚群检测在细胞缺陷疾病的诊断和鉴别诊断中具有重要意义。

川崎病急性期患儿,CD4、CD19细胞和CD4/CD8比值升高,CD8、NK细胞水平降低。合并冠状动脉病变的患儿,其病变严重程度与急性期CD4/CD8比值呈正相关,因此CD4/CD8比值可作为预测血管病变的危险因素。

儿童SLE在很多方面与成人SLE相似。活动期SLE患儿CD8细胞比例明显升高，CD4细胞和CD4/CD8比值胞显著降低。淋巴细胞亚群的测定可作为诊断活动期和非活动期SLE患儿的一项指标。

新生儿疾病

新生儿败血症患儿常呈现CD3、CD4细胞明显降低的现象。联合淋巴细胞亚群检测与其他感染标志物(如CRP、CD64等),有利于新生L感染的早期诊断。此外淋巴细胞亚群检测有助于疗效监测,经有效治疗的患儿，CD3、CD4细胞会明显回升,说明免疫功能的恢复。

呼吸系统疾病

反复呼吸道感染患儿的CD3、CD4细胞以及CD4/CD8比值常明显低于正常儿童。T淋巴细胞功能紊乱、免疫功能低下可能与发病相关。对于免疫功能低下者,在治疗感染的同时,应开展免疫功能调节治疗。

肺炎支原体肺炎急性期患儿免疫功能明显紊乱,CD4、NK细胞以及CD4/CD8比值显著降低,CD8细胞增高。进行对症治疗后,CD4、NK细胞以及CD4/CD8比值_上升,CD8细胞下降。

感染性疾病

传染性单核细胞增多症患儿，血象中异型淋巴细胞增多,多为T淋巴细胞,且以CD8细胞为主,淋巴细胞亚群检测可以辅助传染性单核细胞增多症的诊断。

重症手足口病患儿，T细胞百分比大致正常,NK细胞明显上升,B细胞较正常值降低;危重症手足口病患儿，T细胞百分比较正常值降低,B细胞明显上升,NK细胞较正常值略低。淋巴细胞亚群检测对于疾病进程评估有帮助,B细胞显著升高可能反映进入危重症期。

泌尿系统疾病

肾病综合征患儿，CD3、CD4、CD8、NK细胞以及CD4/CD8比值均降低，B细胞(CD19+)上升。患儿经激素治疗后,对激素敏感的患者CD8细胞降低,CD4/CD8比值和NK细胞升高。与复发、频复发者相比,肾病综合征未复发患儿CD8细胞降低,CD4/CD8比值和NK细胞升高。肾小球肾炎患儿，CD3、CD4细胞以及CD4/CD8比值明显降低。经有效治疗后,上述指标恢复正常。

消化系统疾病

急性轮状病毒性腹泻患儿,CD4细胞百分比显著降低,B细胞(CD19+)显著上升,提示细胞免疫功能减低。对于免疫功能低下患儿,在进行饮食调整、纠正脱水的同时,应进行抗感染治疗。

慢性乙肝患儿,CD3、CD4、CD8细胞绝对数量明显低于健康儿童。经干扰素治疗后，上述指标明显回升,提示机体对治疗有应答。

——体检中心

概要

体检是指通过医学手段和方法对受检者的身体进行检查。它是医疗的诊断环节,是针对症状或疾病及其相关因素的诊察手段。健康体检是在医院或专门]的体检中心对整个身体进行检查,主要目的是为了通过检查发现是否有潜在的疾病,以便及时采取预防和治疗措施。流式细胞仪在筛查易感人群、评估免疫功能等方面可以发挥非常重要的作用。

流式细胞仪在体检中的应用

亚健康

亚健康是一种临界状态,处于亚健康状态的人,虽然没有明确的疾病,但却出现精神活力、适应能力和反应能力的下降。很多亚健康人群常表现出不同程度的疫功能异常。

从事体力劳动的蓝领职员,心理压力与CD4细胞呈负相关,常表现为CD8细胞和NK细胞绝对值减少。人体忽然面对精神和体能双重压力下,机体可能会短暂出现总淋巴细胞、CD3细胞、CD4细胞、CD4/CD8比值和B细胞的快速降低。

长时间工作、值班、缺乏睡眠会导致NK细胞百分比显著下降,NK细胞活性降低。

非体力劳动者的亚健康人群,CD3细胞、CD4细胞百分比和CD4/CD8比值显著低于正常成人的均值,CD4细胞绝对值也明显降低,显示了免疫功能的低下。

慢性疲劳综合症

慢性疲劳综合征(ChronicFatigueSyndrome,CFS)的概念最早是由美国全国疾病控制中心于年正式命名的,在年国际慢性疲劳综合征小组的会议上还对它进行了详细的定义:排除其它疾病的情况下疲劳持续6个月或者以上,并且至少具备以下症状中的四项:(1)短期记忆力减退或者注意力不能集中;(2)咽痛;(3)淋巴结痛;(4)肌肉酸痛;(5)不伴有红肿的关节疼痛;(6)新发头痛;(7)睡眠后精力不能恢复;(8)体力或脑力劳动后连续24小时身体不适。

淋巴细胞亚群检测可见慢性疲劳综合症患者的免疫功能紊乱,部分患者CD8细胞

和NK细胞活性降低,CD4细胞可能降低或升高,部分患者B细胞和CD3细胞还可能略有升高,但不明显。

衰老与免疫功能评估

随着年龄增长,人体的免疫细胞也在发生变化。中国人群中,青年人、中年人和老年人的T细胞、CD4细胞、CD8细胞、B细胞依次降低,但NK细胞依次上升,反映了老年人特异性免疫能力的下降。免疫学预警指标(IRP)可用于老年人免疫功能状况的评估,对疾病的发生风险给予提示。免疫学预警指标阳性的表现为:CMV血清阳性以及以下淋巴细胞亚群的变化:如CD4/CD8比值1.0,B细胞减少,T细胞增殖水平降低等。

社区60岁以上老年人IRP阳性,提示免疫功能下降,机体活动能力和部分认知能力(记忆力和语言能力等)下降。

IRP医院获得性感染的几率显著高于IRP阴性患者。老年患者IRP阳性常预示较高的死亡率。

84岁-94岁高龄老年人群,CD4/CD81.0的老年人存活率较低。

免疫功能紊乱与疾病

机体的免疫功能紊乱,可能是很多疾病反复发作的重要原因。很多免疫功能低下的人群常表现为CD4细胞、CD4/CD8比值降低,CD8细胞升高。由于免疫状态下降,这类人群易发反复性感染(如尿路感染、反呼吸道感染等)。淋巴细胞亚群检测可用于相关人群的筛查。

有慢性心、肺、肝、肾等疾病，或糖尿病、嗜酒等人群，易出现免疫功能低下的状况。这类病人应定期进行淋巴细胞亚群检测,如发现免疫功能紊乱的情况,除进行原发病和抗感染治疗外,还应采取免疫功能调节治疗。

营养与免疫功能

肥胖儿童常显示CD3、CD4细胞以及CD4/CD8比值明显降低,B细胞和NK细胞升高,提示脂肪酸摄取过剩对免疫功能有损害。而肥胖与高血压、糖尿病、冠心病、脑卒中的发病密切相关。

营养不良患儿常呈现CD3细胞和CD4细胞显著减少、CD4/CD8比值降低的现象。而营养不良与贫血、反复呼吸道感染、肺炎、结核病、佝偻病的发病密切相关。

运动与免疫功能

适量的身体锻炼可以对淋巴细胞亚群的数量产生影响。锻炼后的CD3、CD4、CD8、NK细胞均增高,意味着适当的体育锻炼对改善人体免疫功能是有益的。

经长期适量有氧训练后,肥胖患者的CD4+、CD8+细胞明显升高,显示了免疫功能的改善和恢复。